Конфликт по группе крови. AB0- изоиммунизация.


Почему возникает конфликт «мать-плод»?
Конфликт «мать— плод» возникает при несовместимости крови матери и плода, когда в крови матери образуются антитела, повреждающие эритроциты плода, что приводит к гемолитической болезни новорожденного. В основе этого явления лежит различие крови человека по группам в зависимости от наличия в эритроцитах разных антигенов, а в плазме — общегрупповых антител. Число групповых антигенов большое, и они определяют группу крови. Ребенок получает систему группы крови от отца и матери, согласно закону Менделя. Практически определить группу нетрудно. Не все антигены одинаково распространены и одинаково сильны, поэтому не все вызывают серологический конфликт. Чаще всего возникает несовместимость по резус-фактору и АВ0-системе.
О резус-конфликте можно почитать тут: mamuli.info/tag/резус-конфликтная%20беременность/
Конфликт по системе АВО
Изоиммунизация может развиться в результате несовместимости крови матери и плода по системе АВО, Когда у матери О(I) группа крови, а у плода любая другая. Антигены А и В плода могут проникать во время беременности в кровоток матери, приводя к выработке иммунных альфа- и бетта- антител соответственно и развитию у плода реакции
антиген-антитело. Групповая несовместимость матери и плода хотя и встречается чаще, чем несовместимость по резус фактору, гемолитическая болезнь плода и новорожденного при этом протекает легче и, как правило, не требует интенсивной терапии.
Почему происходит иммунологический конфликт?
Первая группа крови не содержит в эритроцитах антигенов А и В, зато имеются антитела α и β. Во всех остальных группах такие антигены есть и поэтому первая группа крови, встретившись с чужеродными для нее антигенами А или В начинает с ними «вражду», разрушая эритроциты содержащие в себе эти антигены. Именно этот процесс и является иммунологическим конфликтом по системе АВ0.
Немного физиологии.
Давайте разберемся, что такое группа крови и почему такой конфликт во время беременности может возникать. Вспомним школьную биологию. Кровь состоит из клеток крови (эритроцитов, лейкоцитов) и плазмы (жидкой части). Эритроциты выглядят как красные двояковогнутые диски.
В эритроците находится огромное количество гемоглобина — сложного белка, который может переносить кислород. Подсчитано, что каждый эритроцит содержит более 3 миллионов молекул гемоглобина.
Также на поверхности эритроцитов могут располагаться специальные белки, так называемые агглютиногены. Их наличие у каждого человека индивидуально. Если эритроциты, на которых есть определенные агглютиногены, попадают в организм человека, у которого таких агглютиногенов нет, он воспринимает их как чужеродные и вырабатывает против них специальные антитела — агглютинины. Предназначение таких антител — разрушение чужеродных эритроцитов. Приблизительно такая ситуация возникает при конфликте групп крови мамы и ребенка во время беременности. То же происходит и при переливании несовместимой крови.
Агглютиногенов на самом деле огромное количество, но в практической медицине обычно определяют всего несколько. Это агглютиногены A, B, и D. Именно по наличию этих агглютиногенов и судят о группе крови человека:

I группа — на эритроцитах нет агглютиногенов А и В.
II группа — на эритроцитах есть агглютиноген А.
III группа — на эритроцитах есть агглютиноген В.
IV группа — на эритроцитах есть агглютиногены А и В.
А агглютиноген D определяет резус-фактор. Если он есть на эритроцитах — кровь считается резус-положительной, а если нет — резус-отрицательной.
Кому стоит опасаться возникновения конфликта по группе крови?

Теоретически такая проблема может возникнуть в том случае, если у матери с будущим малышом оказываются разные группы крови:

  • женщина с I или III группой крови — плод со II;
  • женщина с I или II группой крови — плод с III;
  • женщина с I, II или III группой — плод с IV.

Самым опасным сочетанием считается, если женщина с I группой крови вынашивает ребенка со II или III. Именно такой расклад чаще всех остальных приводит к развитию всех признаков конфликта у матери с плодом и возникновению гемолитической болезни у новорожденного. В группу риска также входят женщины:

  • получавшие в прошлом переливание крови;
  • пережившие несколько выкидышей или абортов;
  • родившие ранее ребенка, у которого развилась гемолитическая болезнь или отставание психического развития.

Возможность развития группового иммунологического конфликта по системе АВ0 существует у семейных пар имеющих следующие сочетания групп крови:

  • женщина с I группой + мужчина со II, III или IV;
  • женщина со II группой + мужчина с III или IV;
  • женщина с III + мужчина со II или IV.

Что способствует развитию конфликта?
От развития конфликта по группам крови защищает правильно функционирующая и здоровая плацента. Её особенное строение не позволяет крови матери и плода смешиваться, в частности, благодаря плацентарному барьеру. Однако это все-таки может произойти при нарушении целостности сосудов плаценты, её отслойке и других повреждениях или, что чаще всего, во время родов. Попавшие в материнское кровяное русло клетки плода, в случае их чужеродности, вызывают выработку антител, которые обладают возможностью проникновения в организм плода и атаки клеток его крови, вследствие чего происходит гемолитическая болезнь. Токсическое вещество билирубин, образующееся в результате такого воздействия в больших количествах, способно повреждать органы ребенка, в основном мозг, печень и почки, что может грозить серьезными последствиями для физического и умственного здоровья малыша.
Проявления группового конфликта, его лечение и профилактика
Беременная женщина не будет ощущать никаких признаков развития конфликта по группам крови. Узнать о его возникновении поможет анализ крови, который покажет высокий титр антител в крови женщины. При развитии гемолитической болезни плода и новорожденного могут наблюдаться:

  • отеки,
  • желтушность,
  • анемия,
  • увеличение селезенки и печени.

Профилактикой серьезных осложнений является регулярная сдача крови на анализ и выявление в ней специфических антител — гемолизинов. В случае их нахождения беременная женщина попадает под наблюдение. Если в результате повторных анализов титр антител продолжит неуклонно расти, а состояние плода ухудшаться, то может потребоваться преждевременное родоразрешение или внутриутробное переливание крови плоду.

Сенсибилизация по системе АВО не является большой проблемой. Важно знать о ней, дважды за беременность проверять титр антител и не перенашивать беременность, так как именно запоздалые роды дают самые тяжелые формы ГБН, требующие заменного переливания крови.
Некоторые врачи-гинекологи регулярно назначают беременным женщинам с первой группой крови анализ на групповые антитела в том случае, если для этого имеются предпосылки. На деле это происходит очень редко, по причине того, что конфликт по системе АВ0 обычно не влечет за собой серьезных последствий и вызывает желтуху только уже у рожденного ребенка, практически не влияя на плод в утробе. Поэтому здесь не существует таких массовых исследований как при беременности резус-отрицательной женщины.
В конфликте по системе АВО плод не болеет, а у новорожденного нет анемии. Однако проявления желтухи в первые дни жизни очень тяжелые и многие дети требуют лечения.
В большинстве случаев гемолитическая болезнь новорожденных о системе АВО не повторяется у последующих детей, (то есть повторные беременности протекают как правило легче- в отличие от резус -сенсибилизации), но и исключать ее (ГБН) нельзя.Поскольку жизни плода угрозы нет, массовая диагностика АВО-конфликта у беременных не проводится.
Отличительной особенностью иммуноконфликта по системе АВО является более позднее появление признаков гемолитической болезни у новорожденного. Как правило, только на 3-6-й день жизни начинает появляться желтушное окрашивание кожи ребенка, что нередко констатируется как физиологическая желтуха, и только при тяжелых формах гемолитической болезни, которая наблюдается в одном случае на 200-256 родов, своевременно устанавливают правильный диагноз. Такие несвоевременно диагностируемые формы гемолитической болезни новорожденных по системе АВО нередко оставляют последствия у детей.
Гемолитическая болезнь новорожденного требует обязательного лечения во избежание развития тяжелых осложнений. Чем ярче выражены симптомы, тем интенсивнее конфликт, для подтверждения которого проводят анализ крови на повышенное содержание билирубина. Смысл лечения заключается в удалении из крови ребенка антител, поврежденных эритроцитов и излишнего билирубина, для чего проводится фототерапия и другое симптоматическое лечение. В том случае, если это не помогает, или уровень билирубина в крови растет очень быстро, то прибегают к процедуре переливания крови новорожденному.
Будущим родителям, попадающим под риск развития такого конфликта, необходимо знать, что, во-первых, вероятность возникновения реального конфликта по группам крови на практике очень мала, а во-вторых, он чаще всего протекает гораздо легче резус-конфликта, и случаи тяжелого течения сравнительно редки, поэтому конфликт по системе АВ0 считается менее опасным для здоровья малыша.

Информация об исследовании

Антитела по системе ABO – иммуноглобулины, которые вырабатываются при появлении в крови антигена, несовместимого в групповом отношении. Группа крови зависит от присутствующих на внешней стороне мембраны эритроцитов специальных белков – агглютиногенов — A, B, и D. У людей с I группой крови эритроциты без белков A и B, при II группе – с белками типа A, при III группе – с белками типа B, при IV группе – с белками типов A и B. Наличие или отсутствие агглютиногена D определяет положительный или отрицательный резус-фактор. Антигрупповые антитела производятся организмом, когда в кровоток попадают эритроциты с незнакомыми агглютиногенами A или B. Реакция этих антител приводит к разрушению чужеродных эритроцитов.

Иммунные антитела могут возникнуть при парентеральном (через кровь) поступлении в организм несовместимого в групповом отношении антигена, при иногруппной беременности, ошибочном переливании крови, несовместимой по системе АВО.

Анализ на антитела по системе ABO – общеклиническое исследование, направленное на выявление в крови альфа- либо бета-изогемагглютининов – естественных антител класса IgG к отсутствующим антигенам A или В.

При иногруппной беременности, послужившей причиной гемолитической болезни плода, иммунные антитела анти-А или анти-В почти всегда присутствуют в крови матери к моменту рождения больного ребенка. При этом им обычно сопутствует высокий титр нормальных антител альфа и бета.

При ошибочном переливании несовместимой крови иммунные антитела анти-А или анти-В появляются обычно на пятый-седьмой день, достигая максимума к пятнадцатому-двадцать пятому дню с последующим падением их титра.

Анализ крови на антитела по системе ABO имеет наибольшую прогностическую значимость при мониторинге беременностей. Его результаты позволяют предупредить развитие иммунологического конфликта, приводящего к эритробластозу новорожденного.

доктор мед.наук Мороков В. А., Pay И.В.

БЫСТРЫЙ МЕТОД ВЫЯВЛЕНИЯ ИММУННЫХ (IgG) АНТИТЕЛ СИСТЕМЫ АВО И ЕГО МИКРОМОДИФИКАЦИЯ В ПОЛИСТИРОЛОВЫХ

ПЛАНШЕТАХ

Коми филиал КГМА, Сыктывкар

Проблема определения иммунных антител системы АВО остается актуальной в практике иммуногематологического обследования беременных и родильниц. Это обусловлено увеличением в последние годы частоты развития гемолитического заболевания новорожденного (ГБН), обусловленного анти-А или анти-В антителами класса IgG . Последние обладают способностью преодолевать плаценту, связывать комплемент и вызывать гемолиз эритроцитов плода in vivo . В наибольшей степени образованию таких антител подвержены женщины с группой крови 0(1).

Своеобразие проблемы состоит в том, что иммунные антитела АВО во всех случаях приходится дифференцировать с естественными изогемагглютининами. С этой целью предложено несколько методов их определения. Один из них основан на параллельном определении титров в солевой и белковой средах при различных температурах . Другая техника основана на предварительной обработке исследуемых сывороток путем прогревания при 70°С с целью разрушения естественных изогемагглютининов с последующим ее исследованием в непрямой реакции Кумбса и солевой среде . Еще один метод, разработанный Матвеевой М.А. и соавт., в большей степени приближается к существующим мировым стандартам и основан на предварительной обработке сывороток унитиолом, донатором сульфгидрильных групп ,

Тем не менее, наш опыт показал, что ни одна из названных выше техник не является достаточно надежной для рутинного применения. Так, при использовании метода параллельного титрования интерпретация результатов часто затруднительна из- за незначительных различий в титрах несмотря на наличие, в ряде случаев, явных симптомов гемолитического заболевания (ГБН) у новорожденных обследуемых родильниц.

Техника, основанная на предварительном разрушении естественных антител путем прогревания предполагает се разведение перед прогреванием в 4 раза. В результате такой обработки во многих случаях происходит нейтрализация иммунных антител анти-А и анти-В. На это со всей очевидностью указывает низкая частота обнаружения иммунных антител описанным методом в сравнении с другими. Кроме того, метод является во многом эмпирическим, поскольку для дифференциации антител IgM и IgG путем прогревания предварительно разведенной сыворотки нет достаточно убедительного теоретического обоснования с позиций иммунохимии.

Исследования 132 образцов сывороток с использованием редуцента унитиола, проведенные нами параллельно с использованием техники с другим донатором сульфгидрила, 2- меркаптоэтанолом (2МЕ) показали большой процент несовпадения результатов. Техника с унитиолом демонстрировала присутствие иммунных антител в то время как в методе с 2МЕ этого не наблюдалось. Математический анализ реакций редуцированных сывороток путем составления корреляционной решетки «2 * Т показал недопустимо низкий коэффициент корреляции, составивший всего 0,45. Наконец, раствор унитиола не обладал способностью редуцировать моноклональные антитела (МКА) IgM анти-А и анти-В (тест-система «Цоликлон»), что со всей очевидностью свидетельствовало о его непригодности для редуцирования IgM. Вероятно, это обусловлено низкой активностью двух SH- группировок унитиола в отношении их способности к разрыву дисульфидных мостиков внутри молекул IgM. Последние не распадаются на мономеры и, как следствие, сохраняют свою активность в серологических тестах in vitro. Таким образом, антитела системы АВО, устойчивые к действию унитиола, помимо IgG фракции могут содержать также и IgM. Унитиолоустойчивые АВО-антитела выявляются с высокой частотой даже среди здоровых доноров (20,4 — 76,6% среди мужчин, 31,2 — 81,4% среди женщин) . Однако известно, что преодолеть плацентарный барьер и обусловить ГБН способны только IgG, активные при 37°С .

Таким образом, надежные методы дифференцирования естественных и иммунных антител системы АВО в нашей стран.: ке разработаны. Это побудило нас остановить свой выбор на технике с

использованием 2МЕ, широко используемой за рубежом для дифференциации IgM от IgG в различных иммунологических тестах in vitro . Далее приводим подробно описание применяемой нами техники и ее ускоренной микромодификации.

Техника теста

1. В сухой чистой пробирке смешивают равные объемы (не менее 0,5 мл) испытуемой сыворотки и 0,2М рабочего раствора 2МЕ. Рабочий раствор готовят путем смешивания 1,49 мл 2- меркаптоэтанола (жидкость с крайне неприятным запахом) и 100 мл изотонического раствора натрия хлорида.

2.Пробу инкубируют в течение 1 часа в термостате или на водяной бане при 37°С.

3. Сыворотку, бывшую в контакте с 2МЕ, испытывают в прямых агглютинационных тестах с эритроцитами 0(1), А(П) и В(Ш) групп. Мы делаем это в методе «immediate spin» следующим образом. В отдельных пробирках смешивают по 100 мкл сыворотки и 50 мкл 1% взвеси отмытых эритроцитов, далее все пробы центрифугируют при 1000 g в течение 15 секунд. Осторожно встряхивая пробирки, добиваются полного отделения осадка эритроцитов, учитывают результаты. При положительном результате наблюдаются агглютинаты различной величины в виде хлопьев или комочков на фоне почти или совсем осветленной жидкости. При отрицательном результате агглютинаты отсутствуют, жидкость на дне пробирки окрашена равномерно в розовый цвет.

Интерпретация результатов

1. Сыворотки, утратившие способность агглютинировать эритроциты групп А(И) и/или В(Ш) в результате инкубации с раствором 2МЕ, не содержат иммунных (IgG) антител против указанных антигенов.

2. Результат с эритроцитами группы 0(1) должен быть всегда отрицательным.

2.Сыворотки, инкубированные с 2МЕ, и сохранившие способность реагировать с эритроцитами А(И) и/или В(Ш) групп, содержат иммунные антитела класса IgG к соответствующим антигенам.

Для определения активности (титра) выявленных иммунных антител готовят кратные разведения редуцированной сыворотки, каждое из них далее испытывают с соответствующими эритроцитами как описано выше. За титр антител принимают величину, обратную наибольшему разведению, в котором наблюдалась отчетливо различимая агглютинация. Исследования тех же сывороток с применением антиглобулиновой техники (непрямая проба Кумбса) показали, что тигры при ее использовании были на 2-3 ступени разведения выше в сравнении с прямыми агглютинационными реакциями, техника которых описана выше.

Мы считаем, что при определении иммунных антител системы АВО нет особой необходимости в исследовании сывороток, обработанных 2МЕ, в непрямой реакции Кумбса. Это обусловлено чрезвычайно высокой плотностью А- и В- детерминант на эритроцитах. По этой причине анти- А и анти-В IgG в полной мере проявляют свос действие уже в прямых агглютинационных тестах. Известно, что на одном эритроците лиц групп А(И), В(Ш), AB(IV) присутствует от 700 тыс. до 1 млн.200 тыс. А- и/или В-эпитопов .

Исследования, проведенные с IgM МКА анти- А и анти-В показали, что контакт с 2МЕ в описанных выше условиях приводит к их полной нейтрализации. Кроме того, как уже указано выше, антитела анти-А и анти-В, выявленные в обработанных сыворотках, во всех случаях реагировали (часто в очень больших разведениях) в непрямой реакции Кумбса. Это со всей очевидностью указывало на их IgG природу. Таким образом, метод оказался специфичным и полностью пригодным для практического использования.

При проведении массовых исследований и выявлении иммунных анти-А и/или анти-В антител с большой частотой могут возникнуть трудности, связанные с необходимостью определения антител и их титра у многих лиц. При этом возникает необходимость в использовании большого количества стеклянной лабораторной посуды, приготовление разведений для титрования большого количества сывороток является трудоемкой процедурой. Это создает большие неудобства в практической работе. Кроме того, этап инкубации с 2МЕ в течение 1 часа не позволяет быстро выполненить исследование. Таким образом, оказалось необходимым разработать ускоренный вариант теста в такой модификации, которая не требовала бы использования больших количеств стеклянной лабораторной посуды. Проведенные нами испытания показали, что полное устранение действия IgM антител анти-А и анти-В сывороток происходит уже в течение 5-7 минут если пробы инкубируются при 45-46°С. Инкубация при

более высоких температурах или использование более концентрированных растворов 2МЕ оказалось неприемлемым, поскольку приводило к образованию геля. Кроме того, мы адаптировали гест для выполнения в 96-луночных палистироловых планшетах с U-образными лунками. Для этого необходимо располагать лабораторной центрифугой для указанных планшет. Мы использовали центрифугу марки ОПН-3, адаптированную для планшет.

Таким образом, модифицированная нами техника определения иммунных антител системы АВО выглядит следующим образом.

1. В пробирках смешивают равные объемы исследуемой сыворотки и 0,2М раствора 2МЕ, пробы инкубируют в течение 7 минут на водяной бане при 46°С.

2. В лунках 96-луночных круглодонных полистироловых планшет к 50 мкл сыворотки, бывшей в контакте с 2МЕ добавляют по 25 мкл 1% йзвеси эритроцитов групп 0(1), А(Н) и В(Ш), перемешивают содержимое лунок путем встряхивания планшеты. Затем планшеты центрифугируют в течение 1 минуты при 1000 об/ мин., встряхивают до полного рссуспендирования осадка эритроцитов и учитывают результаты по наличию или отсутствию агглютинации. В качестве отрицательных контролей служат все пробы с эритроцитами группы 0(1).

Титрование сывороток проводится в лунках планшет, для приготовления кратных разведений в объемах 50 мкл каждое используется 8-канальный пипеточный дозатор производства «Ленпипег’ или «Biohit’. Затем к последним добавляют по 25 мкл 1% взвеси эритроцитов, смешивают встряхиванием, планшеты центрифугируем и учитывают результаты как описано выше. За титр принимается величину, обратную наибольшему разведению, в котором наблюдается отчетливо различимая агглютинация.

Примечания

1 .Более длительная инкубация может привести к формированию геля.

2.Использование более насыщенных взвесей

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

2S эритроцитов может затруднить интерпретацию полученных результатов.

Наши наблюдения показали, что микровариант теста в планшетах является менее трудоемким в исполнении, более экономичным, требует минимальных количеств исследуемого материала и при этом не уступает по своей чувствительности варианту теста в пробирках. При параллельном выполнении тестов во всех случаях получены совпадающие результаты, Его применение резко сокращает необходимость в использовании стеклянных пробирок.

Кроме исследования сывороток, мы с успехом использовали описанные выше техники выявления иммунных антител АВО для определения их в молозиве. По нашим данным, в отличие от антител системы Rh, которые редко обнаруживаются в грудном молоке у сенсибилизированных родильниц, титры иммунных анти-А и/или анти-В антител в молозиве в первые дни после родов часто превышают таковые в сыворотке крови на 2-3 ступени разведения.

Таким образом, разработанный нами и описанный выше ускоренный вариант определения иммунных антител системы АВО с 2МЕ в планшетах может с успехом использоваться как скрининговый тест для массового обследования беременных. рожениц. родильниц в родовспомогательных учреждениях.

ЛИТЕРАТУРА

1 .Матвеева М.А.. Минеева Н.В., Климова К.Н., Волкова О. А. //Гематол. и трансфузиол. — 1989. — №10. С.42-44.

2. Меркулова Н.Н. Распространенность, физиологические и иммуносерологические особенности естественных и иммунных групповых антител системы .АВО у жителей Среднего Приобъя. Авторсф. Дисс..канд биол. наук. М. Тюмень, 1999.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *